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發布時間：2023/4/7 14:29:02 閱讀次數：188
【原理】
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法，在微孔條上預包被慶大霉素偶聯抗原，樣本中的殘留物慶大霉素和微孔條上預包被的慶大霉素偶聯抗原競爭慶大霉素抗體，加入酶標記物后，用TMB底物顯色，樣本吸光值與其所含殘留物慶大霉素的含量成負相關，與標準曲線比較可得出相應殘留物慶大霉素的含量。
【試劑盒技術指標】
規 格：96孔/盒
靈 敏 度： 0.1ppb
檢測時間： 75min
樣本定量檢測下限
組織(豬肉/肝 雞肉/肝 /水產）………………………6ppb
蜂蜜 …………………………………………………6ppb
牛奶 …………………………………………………6ppb
細胞培養液…………………………………………………12ppb
交叉反應率
慶大霉素……………………………………………100%
鏈霉素…………………………………………… <0.1%
新霉素…………………………………………… <0.1%
樣本回收率
組 織……………………………………………85±10%
蜂蜜 ……………………………………………85±10%
牛奶 …………………………………………85±10%
細胞培養液…………………………………………85±10%
【試劑盒組成】
1、微量測試孔：每條8孔，一板12條
2、標準液×6瓶：（1ml/瓶）0ppb、0.1 ppb、 0.3 ppb、
0.9ppb、2.7ppb、8.1 ppb
3、高濃度標準液×1瓶：（1ml/瓶）：100ppb
4、酶標記物 12ml………………………………紅色帽
5、抗體工作液 7ml………………………………綠色帽
6、底物液 A液 7ml………………………………棕色帽
7、底物液 B液 7ml……………………………… 黑色帽
8、終 止 液 7ml……………………………… 黃色帽
9、20X濃縮洗滌液 40ml…………………………白色帽
10、2X濃縮復溶液 50ml…………………………藍色帽
【所用儀器、試劑】
儀器：微孔板酶標儀450nm/630nm、旋轉蒸發儀/氮氣吹干裝置、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平（感量0.01g ）
微量移液器：單道 20µl～200µl、100µl～1000µl、多道 250µl
試 劑：Na2HPO4·12H2O、 NaH2PO4·2H2O、NaCl
【實驗前溶液配制】
配液1、0.02M PBS緩沖液 5.16gNa2HPO4*12H2O+0.87gNaH2PO4*2H2O
+8.5gNaCl，加入蒸餾水至1000ml）用于樣品提取液的配制。
配液2、 將2X濃縮復溶液用去離子水按1：1稀釋。(1份濃縮復溶掖+1份去離子水，用于抗體的稀釋和樣本提取后的復溶)。
配液3、將40ml濃縮洗滌液（20倍濃縮）用去離子水按照
1：19稀釋（1份濃縮洗滌液+19份去離子水），或按
所需用量配制洗滌液。
【樣本前處理步驟】
處理任何樣本時，都必須注意：
（a）實驗中必須使用一次性吸頭，在吸取不同的試劑時要更換吸頭。
（b）實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈，必要時可對實驗器具進行清潔，以避免污染干擾實驗結果。
(a)組織/蜂蜜樣本前處理方法
1、 取2±0.05g樣本與4ml 0.02MPBS緩沖液震蕩混合5min，置65℃水浴環境放置10min；
2、 3000g以上，室溫離心10min；
3、 取50ul上清液，加入450ul 稀釋后的復溶液混勻，混合30s；
4、 取50ul用于分析。
5、 樣本稀釋倍數：20
（b）牛奶
1、取1ml牛奶樣本于離心管中，在3000r/min，4℃離心10min，去除上層脂肪。
2、取50ul上清液，加入950ul 稀釋后的復溶液混勻，混合30s2、
3、取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：20倍
（c）細胞培養液
4、取1ml細胞培養液于離心管中，在3000r/min，4℃離心10min，去除上層脂肪。
5、取10ul上清液，加入390ul 稀釋后的復溶液混勻，混合30s2、
6、取50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數：40倍
【酶標免疫分析程序】
操作步驟：
1、 從4℃冷藏環境中取出所需試劑，置室 溫（20-25℃）平衡30min以上，注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
2、 取出框架及需要數量的微孔，將不用的微孔放入自封袋，保存于2-8℃。
3、 編號：將樣本和標準品對應微孔按序編號，每個樣本和標準品做2孔平行，并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
4、 加標準品或樣本50µl/孔到各自的微孔中，然后加抗體50µl/孔，用蓋板膜封板，輕輕振蕩混勻。25℃環境中反應30min。
5、 取出將孔內液體甩干，用洗液250µl /孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
6、 每孔加入酶標記物100µl，蓋板膜蓋板后置25℃環境中反應30min。取出將孔內液體甩干，用洗液250µl /孔，洗板4－5次，每次間隔15-30s，用吸水紙拍干（拍干后未被清除的氣泡可用干凈的槍頭刺破）。
7、 顯色：每孔加入底物液A液50µl， 再加B液50µl，輕輕振蕩混勻，25℃環境中避光顯色15min。
8、 測定：每孔加入終止液50µl，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀于450nm處（建議用雙波長450/630nm檢測，在5min內讀完數據），測定每孔OD值。
【結果判定】
結果判定有兩種方法，粗略判定可用第1種方法，定量判定用第2種方法。注意樣本吸光值與其所含慶大霉素成負相關。
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