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影響ELISA試劑盒檢測的因素有哪些

發布時間:2019/6/18 15:24:00      閱讀次數:1232

 

    ELISA酶聯免疫吸附,是一種常用的固相酶免疫測定方法。 由于ELISA方法簡單,方便,靈敏,特異性強不需要特殊設備(只需要酶標儀就可以),所以被廣泛應用于各種抗原和抗體測定。

      影響ELISA測定因素有很多,而其操作中需要有一定的技術要求,如操作手法,環境,樣本等,有時?梢姷揭恍╁e誤結果(即假陽性或假陰性)等,上海極威生物為大家解讀ELISA檢測的影響因素之一-樣本的影響

     樣本的影響有哪些?

    1、樣本的保存在冰箱中保存過久的標本,在間接法ELISA測定中會導致本底過深、造成假陽性;為避免上述問題,ELISA試劑盒測定血清標本時最好能新鮮采集;如果不能立即測定,根據相應的時間保存相應的溫度,5 d內測定的血清標本可存放于4℃,1周后測定的血清標本應-20低溫凍存;凍存后融解的標本,蛋白質局部濃縮,分布不均,應充分混合后再測定,但混勻時應輕柔,不可強烈振蕩。

    2、樣本的時間:因為塑料試管能吸附抗原物質,所以樣本長時間放在塑料管內會使樣本內抗原含量下降造成假陰性。最好的方法是使用真空采血管;并使用非抗凝標本,肝素抗凝血漿會增加OD值,EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統中辣根過氧化物酶活性。

    3、樣本受細菌污染因菌體中可能含有內源性辣根過氧化物酶,因此,被細菌污染的標本同溶血標本一樣,可能會產生非特異性顯色而干擾測定結果。

    4、樣本的凝固:樣本凝固不全。在實驗中,有的時候心急為了爭取時間快速檢測,ELISA試劑盒在血液還未開始凝固的時候就強行離心分離血清,導致血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測定過程中形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽性結果;因此血液標本采集后必須使其充分凝固后再分離血清。

5、樣本溶血:溶血標本及混有紅細胞的血清采用ELISA法檢測易產生假陽性?赡苁侨苎逯泻羞^氧化酶物質(紅細胞或血紅蛋白中的亞鐵血紅素),ELISA試劑盒在洗滌過程中往往難以完全洗脫,它可使H2O2釋放出原生態氧(O),從而催化底物四甲基聯苯胺生成可溶性的有色物質,即顯藍色,產生假陽性[2]。所以嚴重溶血標本禁用。

    上海極威生物科技有限公司專業生產各類ELISA試劑盒,公司涵蓋的產品有:ELISA試劑盒、抗體、血清、培養基、細胞株、生物試劑、化學試劑、各類進口試劑及耗材等,品種齊全、質量保障,價格優惠,歡迎各位老師來電咨詢!


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